याची कार्यपद्धती म्हणजे, संवेदनशील सूक्ष्मजीवांच्या 30S रायबोसोमल सबयुनिटला बांधून प्रथिन संश्लेषणास प्रतिबंध करणे.
त्यामुळे ऑक्सिटेट्रासायक्लिन
रायबोझोम्स आणि अमिनोॲसिल-टीआरएनए यांच्यातील संबंधास प्रतिबंध करते. असेही मानले जाते की ऑक्सिटेट्रासायक्लिन ५०एस रायबोझोम्सशी व्यस्तपणे जोडले जाते आणि संवेदनशील सूक्ष्मजीवांच्या सायटोप्लाज्मिक पडद्याची पारगम्यता बदलते. ऑक्सिटेट्रासायक्लिन, उच्च सांद्रतेमध्ये, पेशींमधील प्रथिन संश्लेषणास देखील प्रतिबंधित करू शकते.